الكشف عن فيروس التهاب الكبد الاشتمالي في دجاج اللاحم باستخدام تقنية التحليل الجيني
د. هشام المعايطة
دكتوراه أمراض دواجن
مدير صحة الدواجن / الشركة الوطنية للدواجن

الملخص
يُعدّ التهاب الكبد الاشتمالي (IBH, Hepatitis Body Inclusion) أحد الأمراض الفيروسية المهمة في صناعة الدواجن، وينتج عن الإصابة بفيروس الأدينو الطيري (FAdV, Adenovirus Fowl) التابع لجنس Aviadenovirus، والذي يضم خمس مجموعات (A–E FAdV)، تحتوي بدورها على أنماط مصلية متعددة. يُعدّ النوع E-FAdV، الذي يضم 12 نمطًا مصليًا، الأكثر ارتباطًا بحالات IBH ومتلازمة الاستسقاء التاموري (HPS, Hydropericardium Syndrome)، إضافةً إلى قدرته على إحداث تثبيط مناعي ذي أهمية اقتصادية عالية في دجاج اللاحم.

خلال الفترة الأخيرة، سُجلت في عدد من مزارع دجاج اللحم نفوقات تراوحت بين 10–20%، رافقها خمول وضعف عام وتراجع في استهلاك العلف ومعدلات النمو. وأظهرت الفحوصات التشريحية تضخمًا في الكبد مع تغير لونه إلى الأصفر الشاحب أو الباهت وهشاشة قوامه، إضافةً إلى وجود بؤر نزفية أو نخرية على سطحه، كما لوحظت حالات واضحة من الاستسقاء التاموري.

تم جمع عشر عينات كبد وأربع عينات من السوائل المحيطة بالقلب (السوائل التامورية) من الطيور المصابة، وحُفظت على بطاقات FTA لإجراء فحص تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) للكشف عن فيروس الأدينو، تلاه إجراء التحليل الوراثي للعزلات.

أظهرت نتائج فحص PCR باستهداف جين hexon نتائج إيجابية لأربع عينات من الكبد وجميع عينات السوائل التامورية. أما التحليل الجيني لجزء من جين hexon (بنحو 800 زوج قاعدي) للعزلات التي أعطت نتائج إيجابية مع فحص تفاعل البلمرة المتسلسل PCR، فقد بيّن أن العزلات تتجمع ضمن النمط المصلي 8b التابع للمجموعة E-FAdV، والمعروف بارتباطه الوثيق بحالات IBH وHPS.

تشير نتائج هذه الدراسة إلى أن العترات التابعة للنمط المصلي 8b E-FAdV لا تُعدّ فقط مسببة مباشرة لالتهاب الكبد الاشتمالي ومتلازمة الاستسقاء التاموري وما يرافقهما من نفوقات قد تصل إلى 20%، بل تمتلك أيضًا قدرة مثبطة للمناعة، مما يزيد قابلية الطيور للإصابة بالأمراض الثانوية ويساهم في فشل الاستجابة للتحصينات.

وبناءً على ذلك، توصي الدراسة بتطبيق برامج تحصين فعّالة في أمهات الدجاج باستخدام لقاحات ميتة (Killed vaccine) متوافقة وراثيًا مع العترات المعزولة محليًا، بهدف توفير مناعة أمية متخصصة في دجاج اللحم، وتقليل الخسائر الاقتصادية في مزارع الدواجن.

المواد والطرق (Materials and Methods)

• دجاج لحم (Broiler chicken)
دجاج لحم كان يعاني من ضعف عام وخمول وفقدان الشهية وتوقف النمو ونفوقات معدلها تراوح بين 10–20%.

• العينات (Samples)
تم جمع (10) عينات كبد و(4) عينات من سوائل حول القلب (Hydropericardium) وإرسالها إلى المختبر على بطاقات FTA للتحري عن فيروس الأدينو الطيري.

• استخلاص الحمض النووي (Extraction from the FTA cards)
تم قطع أجزاء صغيرة من كل دائرة في بطاقة FTA ووضعها داخل أنابيب معقمة، ثم أضيف 500 ميكرولتر من محلول TE إلى كل أنبوب، تبع ذلك خلط باستخدام جهاز vortex، وبعد ذلك جرى حضن الأنابيب في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة للسماح بتحرر العينة من البطاقة. بعد الحضانة، تم نقل 100 ميكرولتر من العينة المستخلصة إلى 300 ميكرولتر من مادة TRIzol، ثم جرى حضن الخليط لمدة 5 دقائق.

• التضخيم باستخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR Real-time)
تم تضخيم جين hexon للمستخلص باستخدام تقنية PCR بالاعتماد على بادئات داخلية (house-in)، وكان الحجم المتوقع للمنتج هو 800 زوج قاعدي (bp)، وكانت تسلسلات النيوكليوتيدات للبادئات كما يلي:

adeno-F: 5′-ACATGGGAGCGACCTACTTCGACA-3′
adeno-R: 5′-TCGGCGAGCATGTACTGGTAAC-3′

• التحليل الجيني لجين الهيكسون (Genetic Analysis of the Hexon Gene)
تم اختيار عينات الكبد وعينات السائل التاموري التي أعطت نتائج إيجابية لإجراء التحليل الجيني لجزء من جين hexon (Partial hexon gene sequencing ~800 bp) وتصنيفها (species A–E, serotype 1–7, 8a, 8b, 9–11) باستخدام بادئ أمامي وخلفي في تفاعلين مستقلين، وذلك اعتمادًا على الجزء المنقى من الحمض النووي.

النتائج (Results)

• العلامات السريرية (Clinical signs)
تمثلت العلامات السريرية الملاحظة في قطعان اللاحم المحتمل تأثرها بالعدوى في الخمول، والسلوك التجمعي، وانتفاش الريش، وانخفاض استهلاك العلف، وظهور براز مخاطي أصفر اللون، وأدى انخفاض معدلات النمو إلى تدهور معامل التحويل الغذائي. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت الصيصان في المراحل المتقدمة من الإصابة علامات الخمول والاكتئاب وانخفاض الحركة، كما لوحظ ميل الأفراد إلى التجمع في زوايا الحظيرة، مما أدى إلى معدل نفوق تراوح بين 10 و20%، وبلغ معدل النفوق ذروته بين اليوم الثالث والرابع من المرض (صورة رقم 1).

• الصفة التشريحية (PM lesions)
عند إجراء الصفة التشريحية، تم تحديد آفات في أعضاء حيوية مثل الكبد، والقلب، والكلى، وقد ظهر الكبد متضخمًا، شاحبًا، هشًا، وذا لون أصفر، مع وجود بؤر نخرية ونزيف نقطي دقيق. كما لوحظ الاستسقاء التاموري (Hydropericarditis)، والمتمثل بتجمع سوائل تامورية شفافة مائلة إلى اللون القشي داخل كيس التامور، تصل كميتها أحيانًا إلى 10 مل، مما يعطي القلب مظهرًا منتفخًا شبيهًا بالبالون.

• نتائج PCR
أظهرت نتائج فحص PCR نتيجة إيجابية لفيروس الأدينو لأربع عينات من أصل 4 عينات من السائل التاموري، وأربع عينات من أصل 10 عينات من الكبد، حيث تم الكشف عن فيروس الأدينو عند عدد دورات Ct لفحص PCR بين 18.5 – 27.5 في عينات السائل التاموري، وبين 11.2 – 20.8 في عينات الكبد، كما يظهر في الجدول رقم (1).

• التحليل الجيني
أظهر التحليل الجيني لجين الهيكسون في الأربع عينات التي أعطت نتائج إيجابية مع فحص PCR من السائل التاموري والكبد وجود فيروس الأدينو الطيري – النمط المصلي FAdV E; FAdV 8b كما يظهر في الجدول رقم (1).

الصور والجداول

صورة رقم (1): تبين العلامات السريرية الملاحظة في قطعان اللاحم المصابة بالتهاب الكبد الاشتمالي (IBH).

صورة رقم (2): تبين الآفة المرضية في الكبد في قطعان اللاحم المصابة بالتهاب الكبد الاشتمالي (IBH).

الجدول رقم (1): نتائج PCR والتحليل الجيني

التوصيات

1. تحديد العترة الفيروسية خطوة أساسية لفهم وبائيات المرض، حيث إن العترة FAdV-8b مرتبطة بشكل وثيق بانتشار حالات التهاب الكبد الاشتمالي في دجاج اللاحم، وهذا يساعد في:

• تحديد مصدر العدوى

• تطوير لقاحات دقيقة

• تحسين الأمن الحيوي

• دعم الدراسات الوبائية

2. التحكم في المرض عبر الأمن الحيوي الصارم، والإدارة الجيدة، والسيطرة على الأمراض المثبطة للمناعة.

3. استخدام لقاحات الأدينو الميتة (Killed Adeno vaccine) المحتوية على العترة FAdV-8b في الأمهات لضمان نقل المناعة للصيصان.

المراجع

1. Adel et al., 2021 – Heliyon

2. Al-Hallaq & Bakri, 2020 – Avian Pathology

3. Bakri et al., 2021 – Vaxxinova

4. Hussein et al., 2019 – Jordan Journal of Agricultural Sciences